叶 芬, 张淑贤, 菅成莲, 孙娴婷, 许壁榆, 肖 菲, 黄洪晖, 侯 健, 王 婷
目的 ：探讨血清外泌体中血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）含量及活性与弥漫大 B 细胞淋巴瘤（diffuse large b-cell lymphoma，DLBCL）患者预后的相关性。
方法 ：应用商品化试剂盒（from serum）分离 DLBCL 患者血清外泌体，蛋白质印迹法检测外泌体标志蛋白 CD63、CD9 和肿瘤易感基因 101（tumor susceptibility gene 101，TSG101）的表达水平，透射电子显微镜下观察外泌体的形态和大小，纳米粒径分析仪 Zetasizer 检测外泌体的粒径分布。应用酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清及血清外泌体中 vWF 的表达量，免疫比浊法检测外泌体中 vWF 的活性，免疫组织化学检测不同分期患者组织标本中 vWF 蛋白的表达水平。采用 Kaplan-Meier 法分析患者血清外泌体 vWF 含量及活性对总生存期（overall survival，OS）及无进展生存期（progression-free survival，PFS）的影响。绘制受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线并计算曲线下面积（area under the curve，AUC）分析血清外泌体 vWF 含量及活性对患者预后的预测价值。
结果 ：蛋白质印迹法结果显示，提取的血清外泌体表达外泌体标志蛋白 CD63、CD9 和 TSG101，而不表达细胞蛋白 Calnexin ；透射电子显微镜结果显示，外泌体呈典型的茶托样结构；Zetasizer 粒径分析结果显示，外泌体粒径为 30 ～ 150 nm。DLBCL 患者的分期越晚，血清 vWF 含量越高（P ＝0.016 3）；血清外泌体中 vWF 含量及活性与患者的分期、国际预后指（international prognostic index，IPI）评分及预后均相关；分期晚（Ⅲ＋Ⅳ期）和 IPI 评分高（3 ～ 5），DLBCL 患者的血清外泌体 vWF 含量越高（P ＝ 0.000 8 和 P ＝ 0.004 9），活性也越大（P ＝ 0.017 6 和 P ＝ 0.006 9）。生存分析显示，血清外泌体 vWF 含量及活性越大，DLBCL 患者的 OS 率（P ＝ 0.003 8 和 P ＜ 0.000 1）及 PFS 率（P ＝ 0.038 7 和 P ＝ 0.007 6）越低。ROC 曲线分析提示，外泌体 vWF 含量及活性对 DLBCL 患者 OS（AUC ＝ 0.773 9 和 AUC ＝ 0.7318）及 PFS（AUC ＝ 0.9231 和 AUC ＝ 0.8200）的预测价值大，甚至优于 IPI 评分（AUC ＝ 0.800 8 和 AUC ＝ 0.841 5）。
结论 ：血清外泌体 vWF 含量及活性在高危 DLBCL 患者中增高，并能显著区分患者 OS 与 PFS，提示其可作为 DLBCL 的一种潜在预后标志物。
