2022年, 第42卷, 第06期　刊出日期：2022-06-25

  

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原创研究
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  MXD1在胰腺癌中的表达分析及其对细胞增殖、迁移和Warburg效应的影响

  杨　健, 沈　洋, 蒋永升, 刘德军, 孙勇伟

  肿瘤. 2022, 42(06): 377-387. https://doi.org/10.3781/j.issn.1000-7431.2022.2201-0070

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  目的 ：探讨 MAX 二聚化蛋白 1（MAX dimerization protein 1，MXD1）基因在胰腺癌组织和细胞中的表达情况，及其对胰腺癌细胞增殖、迁移和Warburg 效应的影响。

  方法 ：分别利用基因表达谱数据动态分析（Gene Expression Profiling Interactive Analysis，GEPIA）和基因表达综合（Gene Expression Omnibus，GEO）数据库分析 MXD1 基因在胰腺癌及其癌旁组织中的表达差异。应用免疫组织化学染色法检测 MXD1 在 311 例胰腺癌组织中的表达水平，并通过 Kaplan-Meier 法分析 MXD1 表达水平与患者预后的相关性。采用实时荧光定量 PCR 法检测人胰腺癌细胞系中 MXD1 mRNA 的表达水平。采用脂质体法将 2 条针对 MXD1 基因不同靶点的 siRNA（siMXD1-1和siMXD1-2）分别转入人胰腺癌细胞系 BxPC-3 和 Patu8988，用实时荧光定量 PCR 法和蛋白质印迹法检测 siRNA 对 MXD1 表达的干扰效果。采用 CCK-8 法和 Transwell 小室实验分别检测干扰 MXD1 表达对 BxPC-3 和Patu8988 细胞增殖、迁移能力的影响。同时，根据基因集富集分析（Gene Set Enrichment analysis，GESA）推断 MXD1 可能影响胰腺癌细胞的Warburg 效应。用糖酵解压力测试实验检测干扰 MXD1 表达对胰腺癌细胞的细胞外酸化率（extracellular acidification rate，ECAR）的影响。

  结果 ：MXD1 在胰腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织（P ＜ 0.05）。MXD1 高表达患者的总生存（overall survival，OS）率较 MXD1 低表达者低（P ＜ 0.01）。MXD1 mRNA 在 BxPC-3 和 Patu8988 细胞中表达水平相对较高（P ＜ 0.05）；干扰 MXD1 表达后，BxPC-3 和 Patu8988 细胞中 MXD1 mRNA 和蛋白的表达水平明显下调（P ＜ 0.05），其细胞增殖（P ＜ 0.05）和迁移能力（P ＜ 0.01）也明显降低。糖酵解压力测试结果显示，干扰MXD1 表达后胰腺癌细胞的 ECAR 水平明显降低（P ＜ 0.05）。

  结论 ：MXD1 在胰腺癌组织中高表达，其高表达与患者不良预后相关 ；干扰 MXD1 表达会抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移以及 Warburg 效应。
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  金合欢素通过AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路发挥抗骨肉瘤作用

  魏梦琪, 叶彩红, 黄华坤, 杨春梅, 张露露, 罗进勇

  肿瘤. 2022, 42(06): 388-398. https://doi.org/10.3781/j.issn.1000-7431.2022.2202-0143

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  目的 ：探究金合欢素（acacetin）对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响，及可能的作用机制。

  方法 ：体外培养人骨肉瘤细胞 143B 和 MG63，分别给予不同浓度（0、20、25、30 和 35 μmol/L）的金合欢素处理 ；随后，分别采用结晶紫染色和 MTT 法检测细胞的增殖能力，Hoechst33258 染色法和 FCM 法检测细胞的凋亡情况，细胞划痕愈合实验和 Transwell 小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力 ；最后，采用蛋白质印迹法检测细胞内增殖相关蛋白 [ 增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、细胞周期蛋白 D1（Cyclin D1）和 c-Myc]、凋亡相关蛋白 [Bcl-2、Bax 和剪切型 Caspase-3（cleaved-Caspase-3）] 以及迁移和侵袭相关蛋白 [ 基质金属蛋白酶 2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）、Snail 和 波 形 蛋 白（Vimentin） 和 E- 钙黏蛋白（E-cadherin）] 的表达水平，并进一步检测 AKT、磷酸化 -AKT （phospho-AKT，p-AKT）、糖原合成酶激酶 -3β（glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β）、p-GSK-3β（ser9）和 β- 连环蛋白（β-catenin）的表达情况。

  结果 ：结晶紫染色和 MTT 法检测结果表明，金合欢素可抑制骨肉瘤细胞 143B 和 MG63 的增殖，且蛋白质印记实验结果表明金合欢素处理可降低 143B 细胞内增殖相关蛋白（PCNA、Cyclin D1 和 c-Myc）的表达水平（P 均＜ 0.05）。Hoechst33258 染色和 FCM 法检测结果表明，金合欢素可促进骨肉瘤细胞 143B 的凋亡，且蛋白质印记实验结果显示金合欢素处理可使 143B 细胞内抗凋亡蛋白 Bcl-2 的表达水平下降，促凋亡蛋白 Bax、凋亡标志蛋白 cleaved-Caspase-3 的表达水平升高（P 均＜ 0.01）。细胞划痕愈合实验和 Transwell 小室实验结果表明金合欢素可抑制骨肉瘤细胞 143B的迁移和侵袭，且蛋白质印记实验结果显示金合欢素处理可使 143B 细胞内 MMP-2、Vimentin 的表达水平下降，E-cadherin 的表达水平升高（P 均＜ 0.05）。同时，进一步蛋白质印记实验结果表明，金合欢素处理可使143B 细胞内的 p-AKT、p-GSK-3β（ser9）和 β-catenin 蛋白表达水平下降（P 均＜ 0.05）。

  结论 ：金合欢素可抑制人骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，并促进其凋亡，其可能是通过阻断 AKT/GSK-3β/β-catenin 信号通路发挥作用。
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  乳腺癌组织中NCAPD2的表达及临床意义

  冯麟媛, 白丽娜, 唐春晓, 林贞花, 杨 洋, 崔艾丽

  肿瘤. 2022, 42(06): 399-411. https://doi.org/10.3781/j.issn.1000-7431.2022.2201-0071

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  目的 ：探讨非 SMC 凝缩蛋白 I 复合物亚基 D2（non-structural maintenance of chromosomes condensin I complex subunit D2，NCAPD2）在乳腺癌中的表达及其临床病理学意义。

  方法 ：利用 UALCAN（The University of ALabama at Birmingham Cancer data analysis Portal） 和 UCSC Xena（University of California Santa Cruz Xena）数据库分析癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas，TCGA）数据库中乳腺癌患者的测序数据，得到 NCAPD2 mRNA 在乳腺癌组织和正常乳腺组织中的表达差异以及其表达水平与患者临床病理特征间的关系。采用免疫组织化学法检测 NCAPD2 蛋白在 135 例乳腺癌组织和 36 例癌旁正常组织中的表达水平，分析其表达水平与乳腺癌临床病理特征之间的关系。利用 Kaplan-Meier Plotter 和 ROC Plotter 数据库分析 NCAPD2 mRNA 表达水平与乳腺癌患者生存期的关系以及乳腺癌患者对化疗的响应能力。利用 LinkedOmics、Metascape 和 STRING（Search Tool for the Retrieval of Interaction Gene/Proteins）数据库分析 NCAPD2 在乳腺癌中可能参与的生物学功能。应用蛋白质印迹法检测乳腺癌细胞株中 NCAPD2 蛋白的表达水平。采用 MTT 法和平板克隆实验检测敲减 NCAPD2 对乳腺癌细胞增殖能力的影响，应用蛋白质印迹法和 FCM 法检测敲减 NCAPD2 对乳腺癌细胞周期的影响。

  结果 ：UALCAN 和 UCSC Xena 数据库数据均显示 NCAPD2 mRNA 的表达水平在乳腺癌组织中上调，并与临床分期、临床分型和淋巴结转移有关（P 均＜ 0.05）。免疫组织化学染色结果显示 NCAPD2 蛋白在乳腺癌中的阳性表达率（76.30%）和强阳性率（51.85%）均高于癌旁正常组织，其高表达与乳腺癌淋巴结转移呈正相关（P ＝ 0.004）。生存分析结果显示，NCAPD2 高表达患者的总生存期短于低表达的患者（P 均＜ 0.05）。NCAPD2 高表达患者对化疗的响应能力低于低表达者（P 均＜ 0.05），NCAPD2 对化疗药物（紫杉烷和蒽环类）的敏感性具有较好的预测能力。生物信息学分析结果显示，与 NCAPD2 相关的差异表达基因共有 9 733个（上调基因有 4 873 个，下调基因有 4 860 个），主要参与细胞周期、有丝分裂等生物学进程，且 NCAPD2 与非 SMC 凝缩蛋白 I 复合物亚基 H（non-structural maintenance of chromosomes condensin I complex subunit H，NCAPH）和染色质结构维持蛋白 4（structural maintenance of chromosomes 4，SMC4）等蛋白存在相互作用。乳腺癌细胞 MCF-7 和 Hs578T 中 NCAPD2 蛋白的表达水平较高，敲减 NCAPD2 表达可抑制这 2 种乳腺癌细胞的增殖。细胞周期实验结果显示，与对照组相比，敲减 Hs578T 细胞中 NCAPD2 的表达后，G1 期细胞所占百分比明显提高，而 G2 期细胞所占百分比明显减少（P 均＜ 0.05），同时 G0/G1 期检查点标志物细胞周期蛋白激酶 1（cyclin-dependent kinase 1，CDK1）和细胞周期蛋白激酶6（cyclin-dependent kinase 6，CDK6）的蛋白表达水平明显降低，细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（cyclin-dependent kinase inhibitor 1A，p21）蛋白的表达水平明显上调（P 均＜ 0.05）。

  结论 ：NCAPD2 在乳腺癌中高表达，与患者的不良预后呈正相关，敲减其表达可抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移，因此 NCAPD2 可能是潜在的乳腺癌预后因子及治疗靶点。
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  CCDC77在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

  杨广花, 罗晓勇, 陈宏伟, 师鑫鹏

  肿瘤. 2022, 42(06): 412-423. https://doi.org/10.3781/j.issn.1000-7431.2022.2008-0713

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  目的 ：探讨卷曲螺旋结构域蛋白 77（coiled-coil domain containing 77，CCDC77）在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。

  方法 ：利用人类蛋白质图谱（Human Protein Atlas，HPA）数据库，分析 CCDC77 mRNA 在胃癌组织中的表达水平与胃癌患者预后之间的关系。购买胃癌组织芯片，分析 CCDC77 在胃癌组织中的表达情况与胃癌患者临床病理特征及胃癌患者预后之间的关系。采用蛋白质印迹法检测 CCDC77在 10 例胃癌组织及其相应癌旁正常组织中的表达情况 ；采用脂质体法将携带 CCDC77 基因的重组质粒 pLVX-IRES-ZsGreen1-homo-CCDC77 转入胃癌 HGC-27 和 AGS 细胞中，采用蛋白质印迹法检测转染效率；采用超氧化物歧化酶 WST-1 法、划痕愈合实验和 Transwell 小室实验分别检测 CCDC77 过表达对胃癌细胞系 HGC-27 和 AGS 的增殖、迁移和侵袭能力的影响。

  结果 ：HPA 数据库检索结果显示，胃癌组织中 CCDC77 mRNA 的表达水平明显低于胃正常组织（P ＜ 0.001），CCDC77 mRNA 低表达组胃癌患者的生存时间较 CCDC77 mRNA 高表达组胃癌患者短（P ＝ 0.013）。组织芯片检测结果显示，CCDC77 蛋白在胃癌组织中的表达水平低于癌旁组织（P ＜ 0.01），且与胃癌患者的 TNM 分期、肿瘤浸润深度及淋巴结转移有关（P ＜ 0.05），CCDC77 高表达患者的中位总生存时间较 CCDC77 低表达患者明显延长（P ＜ 0.01），CCDC77 低表达是影响胃癌患者预后的独立危险因素（P ＜ 0.01）。与对照组相比，转染了 pLVX-IRES-ZsGreen1-homo-CCDC77 质粒的 HGC-27 和 AGS 细胞中 CCDC77 的表达水平明显上调（P ＜ 0.05）；CCDC77 过表达可抑制 HGC-27 和 AGS 细胞的体外增殖能力、横向迁移能力及侵袭能力（P ＜ 0.05）。

  结论 ：胃癌组织中 CCDC77 蛋白呈低表达，是影响胃癌患者预后的独立危险因素，CCDC77 基因过表达可抑制胃癌细胞系 HGC-27 和 AGS 的增殖、迁移和侵袭能力。
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  和厚朴酚抑制人乳腺癌SK-BR-3细胞的生长及其机制

  石　翯, 姚梦俐, 张　典, 方文丽, 周　婷, 甘德露, 岳姝君, 钱胡孙, 陈婷梅

  肿瘤. 2022, 42(06): 424-436. https://doi.org/10.3781/j.issn.1000-7431.2022.2101-0013

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  目的 ：探讨和厚朴酚对人乳腺癌 SK-BR-3 细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响，及可能的作用机制。

  方法 ：用不同浓度的和厚朴酚处理人乳腺癌 SK-BR-3 细胞，分别采用结晶紫染色法和 MTT 法检测细胞的增殖能力，用 FCM 法检测和厚朴酚对细胞周期和凋亡率的影响，用划痕愈合实验和 Transwell 实验检测对细胞迁移和侵袭能力的影响。同时，采用蛋白质印迹法检测和厚朴酚处理对 SK-BR-3细胞中增殖相关蛋白增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、 细 胞 周 期 相 关 蛋 白 cyclin D1、凋亡相关蛋白（Bcl-xL、Bax、caspase3 和 cleaved-caspase3）以及细胞迁移和侵袭相关蛋白 [ 基质金属蛋白酶 2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）、波形蛋白（vimentin）和 E-钙黏蛋白（E-cadherin）] 表达水平的影响，对 MAPK/ERK 信号通路中总ERK 以及磷酸化 ERK 蛋白的表达水平的影响。

  结果 ：与空白对照组相比，随着和厚朴酚浓度的提高，和厚朴酚对 SK-BR-3 细胞的增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用显著增强（P ＜ 0.01）。和厚朴酚处理后，SK-BR-3 细胞中 PCNA 和 cyclin D1 蛋白的表达水平明显下降（P ＜ 0.01）；抗凋亡蛋白 Bcl-xL 的表达水平明显下降（P ＜ 0.01），促凋亡蛋白 Bax 的表达水平明显升高（P ＜ 0.05），caspase3 的表达水平明显下降（P ＜ 0.01）而 cleaved-caspase3 的蛋白水平上升（P ＜ 0.05）；同时，迁移和侵袭相关蛋白 MMP-2 和 vimentin 的表达水平明显下降（P ＜ 0.01），而 E-cadherin 蛋白的表达水平明显升高（P ＜ 0.01）；MAPK/ERK 信号通路中 p-ERK1/2 的蛋白水平明显降低（P ＜ 0.01）。

  结论 ：和厚朴酚可以在诱导人乳腺癌 SK-BR-3 细胞凋亡同时抑制其增殖、迁移和侵袭，具体作用机制可能与抑制 MAPK/ERK 信号通路的活性有关。
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  3，3- 二吲哚甲烷在体外和体内对卵巢癌 SKOV3 细胞增殖的影响

  邹明花, 范卫东

  肿瘤. 2022, 42(06): 437-444. https://doi.org/10.3781/j.issn.1000-7431.2022.2012-1165

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  目的 ：探讨 3，3- 二吲哚甲烷（3，3-diindolylmethane，DIM）对卵巢癌细胞 SKOV3 体外增殖以和体内成瘤能力的影响，以及可能的作用机制。

  方法 ：采用不同浓度的 DIM 处理 SKOV3 细胞后，观察 DIM 对 SKOV3 细胞形态的影响 ；进一步用 Hoechst33342 染色后，观察 DIM 对 SKOV3 细胞凋亡的影响 ；随后采用 CCK-8 法和平板克隆形成实验检测 DIM 对 SKOV3细胞增殖能力的影响。皮下接种 SKOV3 细胞构建 BALB/c 裸鼠移植瘤模型，通过灌胃给药途径观测 DIM 对 SKOV3 细胞移植瘤生长的影响 ；采用免疫组织化学法检测 DIM 对肿瘤组织中 AKT、磷酸化 AKT（phospho-AKT，p-AKT）及 Bcl-2 和 caspase3 蛋白表达水平的影响。

  结果 ：DIM 能明显改变 SKOV3 细胞的形态，并诱导其凋亡。DIM 能明显抑制 SKOV3 细胞的增殖能力和克隆形成能力（P ＜ 0.05），并呈一定的浓度依赖性。体内研究显示，DIM 可显著抑制小鼠 SKOV3 细胞移植瘤的生长能力（P ＜ 0.05）；免疫组织化学法检测结果可见，DIM 可明显下调移植瘤中 p-AKT 和 Bcl-2 蛋白的表达水平，而上调 caspase3 的表达水平（P＜ 0.05），但对 AKT 总蛋白表达无明显影响。

  结论 ：DIM 可有效抑制卵巢癌细胞的体外增殖能力及体内成瘤能力，其作用机制可能与抑制 AKT 的活化以及 Bcl-2 表达，诱导 caspase3 表达有关。
综述
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  单细胞转录组测序技术在头颈癌中应用的研究进展

  钟雪敏, 黄光武

  肿瘤. 2022, 42(06): 445-450. https://doi.org/10.3781/j.issn.1000-7431.2022.2107-0440

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  头颈癌（head and neck cancer，HNC）具有较高的瘤内异质性，即转录、遗传和表观遗传学均存在明显差异。研究表明，肿瘤内的异质性对癌症的预后有着十分重要的意义。近 10 年来，随着单细胞转录组测序技术（single cell RNA-sequencing，scRNA-seq）的飞速发展，为研究肿瘤异质性提供了重要的信息。该技术可从单个细胞层面识别肿瘤微环境（tumor microenvironment，TME）中不同的细胞群，从而获得特定微环境下的细胞序列差异，为研究HNC 的发病机制及治疗提供了新的方向。目前，通过 scRNA-seq 已经对HNC 的异质性及免疫细胞与癌细胞之间的关系有了创新性了解。这些研究结果必将引导着临床治疗，促进 HNC 个性化和精准治疗的发展。因此，本综述旨在介绍 scRNA-seq，并讨论该技术在 HNC 领域中的研究进展。