目的:探讨叶酸受体α（folate receptor alpha，FOLR1）在肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSCs）中的表达特征及其在肝脏疾病中的潜在作用，并构建HSCs特异性敲除FOLR1基因小鼠模型。
方法:本研究基于单细胞转录组与临床公共数据库，分析了FOLR1在肝癌组织及HSCs中的表达情况。通过CRISPR-Cas9基因编辑技术构建的Lrat-Cre以及FOLR1 flox小鼠，用于构建HSCs特异性FOLR1基因敲除小鼠，并通过PCR法检测评估FOLR1基因敲除效率和模型特异性。采用二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine，DEN）联合四氯化碳（CCl4）诱导未敲除FOLR1基因的FOLR1fl/fl小鼠（对照组）和敲除FOLR1基因的FOLR1ΔHSC小鼠构建自发小鼠HCC模型，随后通过实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法及荧光免疫组织化学法检测各组小鼠中FOLR1 mRNA和蛋白的表达水平。
结果:FOLR1在激活的HSCs中显著高表达，且与HCC患者不良预后相关。成功构建获得HSCs特异性FOLR1基因敲除小鼠FOLR1ΔHSC，经PCR及测序验证其敲除效率良好。实时荧光定量PCR检测结果提示，相较于FOLR1fl/fl小鼠，DEN联合CCl4诱发肝癌的FOLR1ΔHSC小鼠肝组织中FOLR1 mRNA的表达水平下调了60.31%（P＜0.05），ELISA法检测结果显示血清中FOLR1蛋白浓度降低了38.32%（P＜0.01），免疫荧光染色法检测结果显示肝组织中FOLR1蛋白阳性染色面积减少了67.96%（P＜0.01）。
结论:成功构建获得HSCs特异性敲除FOLR1基因的小鼠，为进一步探索FOLR1在HSCs中可能的作用机制提供了独特的动物模型平台。
目的:探究胰腺癌细胞中侵袭足（invadopodia）的结构特征。
方法:采用免疫荧光染色后在激光共聚焦显微镜下观察低侵袭性胰腺癌PANC1细胞和高侵袭性胰腺癌BXPC3细胞中侵袭足的形成情况，并通过明胶基质降解实验研究侵袭足形成与蛋白水解功能的关系。采用转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）处理胰腺癌BXPC3细胞，再用明胶基质降解实验和免疫荧光实验检测TGF-β对BXPC3细胞侵袭足形成的影响；同时采用实时荧光定量PCR法检测TGF-β对BXPC3细胞中基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）-1和MMP-9 mRNA表达的影响。最后，采用分辨率更高的结构光照明显微镜（structured illumination microscopy，SIM）对BXPC3细胞的侵袭足进行了三维结构重建，进一步探究了其空间结构特征。
结果:通过免疫荧光实验发现，在胰腺癌高侵袭性细胞BXPC3中可形成散在分布的单个点状的侵袭足，也可排列形成特殊的Rosette环结构，而胰腺癌低侵袭性细胞PANC1中则没有这种明显的侵袭足特征。胰腺癌BXPC3细胞中形成的侵袭足与基质降解功能相关，且通过TGF-β刺激后，侵袭足的形成数量会增加，MMP-9 mRNA的表达水平被上调（P＜0.000 1），从而增加细胞的蛋白水解活性。通过SIM进一步重构出了BXPC3细胞中侵袭足的三维结构。
结论:基于激光共聚焦显微镜和SIM初步观察并描述了胰腺癌细胞中侵袭足的结构特征，并探究了TGF-β对胰腺癌细胞侵袭足的形成和功能影响。
目的:探讨多功能核蛋白UHRF1（ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1）对宫颈鳞癌放射治疗耐受的影响，及可能的作用机制。
方法:分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测宫颈鳞癌细胞SiHa和CaSki及其放射耐受细胞株SiHa-R和CaSki-R中UHRF1 mRNA和蛋白的表达水平，并通过细胞外酸化率（extracellular acidification rate，ECAR）、葡萄糖消耗和乳酸生成实验分析亲本SiHa和CaSki细胞和放射耐受细胞SiHa-R和CaSki-R的糖酵解水平。通过慢病毒感染的方法将特异性针对UHRF1基因的shRNA（shUHRF1）转入SiHa-R和CaSki-R细胞，构建沉默UHRF1的宫颈鳞癌放射耐受细胞；采用CCK-8实验和克隆形成实验评估沉默UHRF1表达后对SiHa-R和CaSki-R细胞放射敏感性的影响，再通过ECAR、葡萄糖消耗和乳酸生成实验分析对SiHa-R和CaSki-R细胞糖酵解的影响，同时进一步通过蛋白质印迹法检测葡萄糖转运蛋白1（glucose transporter protein 1，GLUT1）、己糖激酶2（hexokinase 2，HK2）和M2型丙酮酸激酶（pyruvate kinase isozyme type M2，PKM2）表达水平的变化。最后，建立裸鼠移植瘤模型并行18F-FDG PET/CT成像，评估UHRF1表达下调对肿瘤放疗后糖代谢活性及肿瘤体积的影响。
结果:SiHa-R和CaSki-R细胞中UHRF1 mRNA和蛋白的表达水平显著高于其亲本细胞（P均＜0.01）。SiHa-R和CaSki-R细胞的ECAR值、葡萄糖摄取和乳酸生成量均较其亲本细胞显著提高（P均＜0.001）。沉默UHRF1表达后，SiHa-R和CaSki-R细胞在X射线照射处理后的细胞增殖能力和克隆形成能力均显著下降（P均＜0.01）；糖酵解水平明显降低，表现为ECAR值、葡萄糖消耗及乳酸生成量均显著减少（P均＜0.001）；同时GLUT1、HK2和PKM2的蛋白表达水平均显著下调（P均＜0.001）。shUHRF1组裸鼠移植瘤的18F-FDG摄取和肿瘤体积均显著低于阴性对照组（shNC）（P均＜0.001），肿瘤抑制率达30%。
结论:UHRF1在宫颈鳞癌放射治疗耐受细胞中高表达，其可能通过上调糖酵解关键酶促进糖酵解，从而增强肿瘤细胞对放射治疗的耐受性。沉默UHRF1表达可显著抑制宫颈鳞癌细胞的糖代谢并增强对放射治疗的敏感性，提示UHRF1有望成为改善宫颈鳞癌放射治疗效果的潜在分子靶点。
目的:探讨解整合素-金属蛋白酶6（A disintegrin and metalloproteinase 6，ADAMTS6）对甲状腺癌（thyroid carcinoma，THCA）细胞增殖、迁移和铁死亡的影响，及其可能的作用机制。
方法:通过检索生物信息学网站和数据库，分析癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas，TCGA）数据库THCA数据集中ADAMTS6基因在癌组织及正常甲状腺组织中的表达差异，并进一步分析ADAMTS6表达与THCA患者生存预后的相关性及与THCA患者临床病理特征的相关性。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测ADAMTS6在THCA组织和甲状腺正常组织中的表达情况。蛋白质印迹法检测ADAMTS6在正常甲状腺细胞和THCA细胞中的表达情况。采用siRNA技术构建敲降ADAMTS6表达的TPC-1和BCPAP细胞，随后分别采用CCK-8法、克隆形成实验和EDU实验检测敲降ADAMTS6表达对BCPAP和TPC-1细胞增殖的影响，Transwell小室实验检测对BCPAP和TPC-1细胞迁移的影响。采用铁死亡诱导剂RSL-3处理敲降ADAMTS6表达的BCPAP细胞，再用CCK-8法检测对细胞活力的影响，流式细胞实验检测对细胞脂质过氧化的影响，蛋白质印迹法检测对铁死亡相关蛋白溶质载体家族7成员11（solute carrier family 7 member 11，SLC7A11）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase 4，GPX-4）以及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路中β-catenin蛋白表达水平的影响。使用Wnt/β-catenin信号通路激活剂CHIR-99021处理敲降ADAMTS6表达并用RSL-3处理后的BCPAP细胞，再用流式细胞实验检测对细胞脂质过氧化的影响，蛋白质印迹法检测对铁死亡相关蛋白SLC7A11、GPX-4以及Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin蛋白表达的影响。
结果:数据库分析与蛋白质印迹法检测结果显示，ADAMTS6在THCA中表达上调（P＜0.05）；ADAMTS6高表达与患者总生存期呈负相关（P＜0.05），高表达ADAMTS6与THCA患者肿瘤分期和淋巴转移呈正相关（P均＜0.05）。敲低ADAMTS6表达后，BCPAP和TPC-1细胞中ADAMTS6 mRNA和蛋白的表达水平明显下调（P均＜0.05），细胞的增殖和迁移能力被显著降低（P均＜0.05）。用RSL-3处理敲降ADAMTS6表达BCPAP细胞后，可进一步降低BCPAP细胞的铁死亡抵抗能力，促进了细胞脂质过氧化（P均＜0.05），蛋白质印迹法检测结果显示显著降低了BCPAP细胞中SLC7A11、GPX4和β-catenin蛋白的表达水平（P均＜0.05）；Wnt激活剂CHIR-99021可上调敲降ADAMTS6表达并用RSL-3处理的BCPAP细胞中GPX4、SLC7A11和β-catenin蛋白的表达水平（P均＜0.05），同时细胞的脂质过氧化下降（P＜0.05）。
结论:ADAMTS6在THCA组织中高表达，其高表达与患者不良预后相关；干扰ADAMTS6表达会抑制THCA细胞的增殖迁移能力与铁死亡抵抗能力，其作用机制可能与减弱wnt/β-catenin信号通路的活性有关。
Src是一种非受体酪氨酸激酶（non-receptor tyrosine kinases，NRTKs），属于Src蛋白激酶家族（Src-family protein kinases，SFKs）。研究显示，Src在肿瘤中呈高表达标志着患者预后差，生存期短，因此抑制Src的表达有望成为肿瘤治疗的一条重要途径。目前，已有多种Src抑制剂被批准上市，用于治疗恶性肿瘤，同时基于纳米技术递送Src抑制剂的研究已经在基础研究领域取得了一定成果。因此，本文对纳米颗粒在Src抑制剂递送中的最新研究成果进行总结，以期为以纳米材料为载体的新型肿瘤治疗药物的研发及应用提供一定的理论依据。
DNA损伤应答（DNA damage response，DDR）是细胞在DNA损伤时激活的一系列复杂信号转导通路及其调控的DNA损伤修复、细胞衰老和细胞凋亡等途径的过程，是细胞维持基因组稳定性和完整性的重要机制。研究发现，部分依赖于端粒延长替代机制（alternative lengthening of telomeres，ALT）维持端粒功能的肿瘤细胞（ALT细胞）中，存在着较高水平的端粒DNA损伤及复制压力。这些损伤或复制压力一方面可以通过DDR激活同源重组相关途径介导端粒的合成，维持ALT；另一方面，过度的DDR响应则可能诱导ALT细胞发生衰老或凋亡。因此，ALT细胞必须依赖一套精准的调控体系将DDR维持在适度的激活水平，以平衡端粒合成和细胞死亡之间的关系。然而，目前ALT细胞中DDR的调控方式尚未完全阐明。因此，本文旨在综述当前已知的ALT相关DDR调控方式与机制，以期为ALT分子机制的研究提供线索与理论基础，为深入解析ALT的分子基础及开发靶向治疗策略提供理论参考依据。
